液氮超低温保藏菌种的方法

点击次数:   更新时间:18/10/09 17:01:10     来源:www.zbyedancj.com关闭分    享:
  液氮超低温保藏就是将菌种密封在有保护剂的安瓿管内,经控制速度冻结后,在-150℃~-196℃液态氮超低温罐中保藏。
  1.菌种制备
  保藏孢子时,取孢子制成悬液,加入保护剂,装入无菌安瓿管内。保存菌丝体时,用液体振荡法培养菌丝球,或用平板培养菌丝体,也可用麦粒菌种。取适量放入无菌的装有保护剂的安瓿管内。
  2.安瓿管
  制作安瓿管的玻璃,要具有经受温度突变而不破裂、容易用火焰熔封管口、恢复培养时容易打开的特点。一般采用硼硅玻璃,管的大小根据需要而定,通常是75毫米×10毫米或能容1.2毫升液体的安瓿瓶比较合适。选好安瓿管后,每管加进0.8毫米保护剂,塞上棉塞,在1千克/平方厘米压力下灭菌15分钟,供冻结琼脂菌丝片或麦粒菌种用。如冻结孢子悬液时,则空管灭菌。
  3.保护剂
  用体积比10%甘油蒸馏水溶液或10%二甲亚砜蒸馏水溶液作保护剂。
  4.冻结保藏
  将上述准备好的菌种以无菌操作移入加有保护剂的安瓿管中,用火焰将安瓿管上部熔封,浸在水中检查有无漏气。然后将封口的安瓿管放在慢速冻结器内,控制冻结速度,一般每一分钟降低1℃,使样品逐步均匀地冻结到-40℃。-40℃以下的冻结速度,可不用控制而迅速下降。安瓿管冻结后,立即放入液氮罐中。罐内的气相温度为-150℃,液体温度为-196℃。
  5.恢复培养
  需要使用保藏菌种时,将安瓿管从液氮罐中取出,立即放入33~40℃的水浴中振荡至管内冻结物全部融解,开启安瓿管,将管内菌种接入适宜培养基培养即可。
  液氮超低温保藏是目前长期保藏菌种的一种方法,用它进行保藏各类食用菌的菌种都获得了满意的结果。
  目前常用的液氮罐的容积有10升、35升两种,也有更大的,如美国菌种保藏委员会(ATCC)使用的容积达250升和650升。常用的备用液氮罐容积为10~35升,也有100升的。由于液氮来源困难、液氮罐设备费用大,目前这种保藏方法还未广泛普及使用。可以了解更多关于液氮超低温保存原理。
小编:Qian

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